猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体 说明书

猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒

说明书

【产品名称】

通用名称：猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒

英文名称：Diagnostic Kit For Antibodies To

Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus（PRRSV Ab）,ELISA

【规格】

96 T×1

【预期用途】

本试剂盒主要目的是测定猪血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体，可用于评估感染猪的血清学诊断以及猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗免疫状况分析。

【检验原理】

本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，由包被有高纯度的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的PRRSV-Ab结合，再与酶标抗猪IgG抗体形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶标抗猪IgG抗体"复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。显色深浅与PRRSV-Ab的量成正比，当样本反应显色后，经酶标仪检测所得结果超过设定的临界值时结果判为阳性，即表明免疫产生了抗体或有自然感染存在。                             

【主要成份】

【自备器材】

1．酶标仪，双波长450/630 nm滤光片

2．微量移液器（单道10-100 μl、0.5-10 μl、多道30-300 μl）

3．水浴箱或恒温箱

4．微量振荡器

5．一次性枪头（10 μl，200 μl）

【样本要求】

1．本试剂检测的样本为猪血清，样本应无菌采集，2 ℃－8 ℃贮存应不超过一周，长期应在－20℃以下保存。

2．避免使用严重溶血、有沉淀物、含悬浮纤维蛋白及污染长菌的血清样本。

【实验准备】

1．试剂盒组分回温平衡:试剂盒组分在实验前，先取出置室温30 min，可以获得最佳结果。

2．样本稀释：用试剂盒提供的样本稀释液将样本作40倍稀释 （例:将5 μl样本加至195 μl样本稀释液中）。

3．配制洗涤液：将试剂盒所提供浓缩洗涤液直接用去离子水稀释10倍（例：将10 ml洗涤液加入90 ml去离子水中）。若10倍浓缩洗涤液出现结晶，属正常现象，放置37 ℃至溶解后即可。

【检验方法】

1. 加样：根据样本数量，取所需板条，检测时，设阴、阳性对照各2孔，分别加入不用稀释的阴、阳性对照血清100 μl于相应孔中（可不设空白对照）。其余为样本孔，每孔加100 μl用样本稀释液稀释好的样本。

2. 温育：加样后，盖上盖板膜，置37 ℃温育30 min。

3. 洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应板孔，静置10 s，直接甩出，洗涤3次，最后一次洗涤后吸干板内液体。

4. 加酶：每孔加酶标记物100 μl。

5. 温育：加好酶标记物的反应板盖好盖板膜，置37 ℃温育30 min。

6. 洗板：同步骤3。

7. 显色：每孔加显色剂100 μl，振荡混匀，37 ℃避光反应10 min。

8. 终止：每孔加终止液50 μl，振荡10 s，充分混匀，终止后即读数。

9. 读数：以450 nm/ 630 nm双波长检测，读取各孔吸光度值（OD值）。充分混匀，终止后即读数。

【结果判定】

在酶标仪上测各孔的OD值。检测结果有效的条件是阳性对照孔的平均OD值≥0.60，阴性对照孔的平均OD值＜0.40；样品中抗体存在与否，或样本中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方式处理: 

 S/P=(样本OD_450/630值－NCx(—))/(PCx(—)－NCx(—))，其中NCx(—)表示阴性对照孔平均OD_450/630值（若小于0.05，则按照0.05计算），PCx(—)表示阳性对照孔平均OD_450/630值；

当样本的S/P≥0.20时判为阳性；样品S/P值＜0.20时判为阴性。

【注意事项】

1.请在使用试剂盒之前，仔细阅读说明书。

2．请不要使用过期的试剂盒组分，不要将不同批次的组分混合使用。

3．本试剂盒应按含有传染性材料对待，试验废弃物应经121 ℃高压蒸汽灭菌30 min，或用5.0 g/L次氯酸钠等消毒剂处理30 min后废弃。

4．未用完的微孔板须放回有干燥剂的铝箔袋并密封2 ℃-8 ℃保存。未用完的液体试剂应盖好瓶盖，与其它配套组份放入试剂盒中于2 ℃-8 ℃避光保存。

5．应用微量移液器加入样本及试剂，并经常校对其准确性。

6．加洗涤液时应做到满而不溢，防止孔口有游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。

7．终止液有腐蚀性，若溅到皮肤或衣物上应立即用大量清水冲洗干净。

【规格】 96孔/192孔/480孔/盒

【贮藏与有效期】  2~8℃保存，有效期为12个月。

仅供科研使用