牛羊O型口蹄疫抗体ELISA抗体检测试剂盒说明书

牛羊O型口蹄疫抗体ELISA 抗体检测试剂盒说明书

【名  称】

通用名： 牛羊O型口蹄疫抗体 ELISA 抗体检测试剂盒

拼 音：kou ti yi bing du O xing jing zheng ELISA kang ti jian ce shiji he

【原  理】

本品系由包被口蹄疫 O 型 VP1 重组抗原和口蹄疫O型VP1 蛋白单克 隆抗体及其他试剂组成，应用酶联免疫竞争法原理（ELISA） 检测猪血清 及牛、羊血清中口蹄疫病毒 O 型抗体。

【使用意义】

牛羊O型口蹄疫抗体 ELISA 抗体检测试剂盒用于检测猪血清及牛、羊 血清中口蹄疫病毒 O 型抗体。

【试剂盒组成】

【样品制备】

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

【洗涤液配制】

使用前，20×浓缩洗涤液应恢复至室温（25℃左右） ，并摇动使沉淀的盐 溶解，然后用蒸馏水或去离子水作 20 倍稀释（例如：用 20mL 浓缩液加 上 380mL 水），稀

释好的洗涤液在 4℃可以存放 15 天。

【样品稀释】

待检血清 5 倍稀释：具体为在血清稀释板中按 5 倍稀释待检血清（80μL 样 品稀释液中加 20μL 待检血清，混匀即可）。

注意：阳性对照血清和阴性对照血清不用稀释。

【使用方法】

1. 使用前将试剂盒置于室温 30 分钟，待其恢复至室温。(注： 阴、阳对照 血清不用回温，从 4℃取出，即可使用，使用后立即放回4℃保存)

2. 取所需用量的 FMDV-O 抗原包被板条，设阴性及阳性对照各 2 孔，未用 的板条尽快密封，2~8℃保存。

3. 阴性、阳性对照孔分别加入阴性、 阳性对照血清 50μL；样品孔每孔加 入稀释后的血清样本 50μL ，然后每孔加入酶标记物 50μL。

4. 轻微振荡混匀；盖上封板膜封板，置于 37℃环境避光反应 30 分钟。

5. 洗板：小心揭开封板膜，将孔内液体甩干，加洗涤液 300μL/孔，无需静 置，弃去液体，充分洗涤 4~5 次，最后一次用吸水纸拍干。

6. 显色：每孔先各加入底物 A 液 50μL ，再各加入底物 B 液 50μL ，轻轻振 荡混匀，并在 37℃下避光反应 15 分钟。

7. 读数： 每孔各加 50μL 终止液，在酶标仪于 450nm 处测定 OD 值（在 5 分钟内读完数据）。

【结果判定】

成立条件：

阴性对照： 阴性对照孔 OD 均值≥ 0.5；

阳性对照：阳性对照孔 OD 均 值≤0.2 ，或阳性对照阻断率在 80%以上；

计算方法：阻断率（PI）=（阴性对照 OD 值均值-样品OD 值）/ 阴性对照 OD 值均值×100%

结果判定：样品阻断率＜30% ，判为口蹄疫病毒 O 型抗体阴性；样品阻断 率≥30% ，判为口蹄疫病毒 O 型抗体阳性。

猪血清效价判定：

牛、羊血清效价判定：

【注意事项】

1. 操作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。

2. 采集血清时应无菌操作，要求血清清亮无溶血，避免使用严重溶血的血 清。

3. 用于检测的样品应保持新鲜血清保存时间不能太久，血清解冻后应该充 分混匀，血清稀释后在加样前也要混合均匀，解冻后的血清争取一次性 检测完毕，如需做多次检测，建议少量分装冷冻保存。

4. 若血清出现浑浊或沉淀，建议离心后取上清检测。

5. 试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

6. 试验中常用到的酶标仪、加样器、洗板机、恒温箱及存放试剂的冰箱等 仪器设备要定期维护和校准，确保仪器设备正常使用，避免试验误差。

7. 所有样品洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8. 微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽后方可，未用完 的微孔板须放入有干燥剂的密封袋中保存。

9. 剩余样品及废弃物应经 121℃高压蒸汽灭菌 30 分钟，或用 5.0g/L 次氯酸 钠等消毒剂处理 30 分钟后废弃。

10. 不同批号试剂组分不得混用。

【贮藏与有效期】

2~8℃保存，有效期为 12 个月。

温馨提示：抗原包被板真空包装袋若有漏气，抗原包被板仍然正常有效， 不影响实验结果，请放心使用。

  仅供科研使用