鸡传染性支气管炎 ELISA 抗体检测试剂盒说明书

鸡传染性支气管炎 ELISA 抗体检测试剂盒说明书

【名  称】

通 用 名  鸡传染性支气管炎 ELISA 抗体检测试剂盒

汉语拼音  Ji chuan ran xing zhi qi guan yan ELISA kang ti jian ce shiji he

【主要组分与含量】

【作用与用途】   用于检测鸡血清中传染性支气管炎病毒抗体。评估鸡场中传染性支气管炎病毒疫苗免疫状况。

【注意事项】

（1）实验前，将试剂盒取出置室温回温，至少30分钟，实验完成后置2～8℃保存。

（2）若试剂盒阴阳性对照、酶标记物出现少量悬浮物，属正常现象。

（3）请在试剂盒规定的有效期内使用；禁止非同批试剂盒混用。

（4）没有用完的抗原包被板应贮存在密封塑料袋内，置2～8℃存放。

（5）避免底物液暴露于强光，避免接触氧化剂。

（6）浓缩洗涤液用蒸馏水或纯水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。

（7）严格按照操作程序，仔细的吸液、计时，充分洗涤，对于获得精确的结果是非常必要的。

（8）使用血清稀释板将所有待检血清稀释好，再进行检测。

【用法与判定】  

1  用法

1.1  样品准备  取动物全血，4000r/min离心10分钟，收集上清。或采集血液，待凝固后自然析出血清。血清清亮，无溶血。

1.2  样品稀释  将待检血清样品在血清稀释板中稀释50倍（例如：在血清稀释板中先加入196μL样品稀释液，再加4μL待检血清。不同的样品要注意换吸头。样品在稀释过程中要充分混匀。阴性、阳性对照不稀释，直接使用。

1.3  洗涤液配制  20倍浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（20~25℃），然后用蒸馏水或纯水作20倍稀释，混匀（例如：5mL的浓缩洗涤液加上95mL纯水）。

1.4  操作步骤

1.4.1  取抗原包被板（根据样本多少，可拆开分次使用），先用1×洗涤液洗涤抗原包被板2次（300μL/孔），在拍干后的抗原包被板中每孔加入90μL样品稀释液和稀释50倍后的血清样品10μL，轻微振荡混匀；另外设阳性对照（根据样本种类选取对应的对照品）、阴性对照各2孔，100μL/孔。置37℃孵育30分钟。

1.4.2  弃去板中液体，每孔加入稀释好的洗涤液300µL，不必静置，弃掉孔中洗涤液，重复洗涤共计洗板5次，最后一次拍干。

1.4.3  每孔加入100μL酶标记物，轻微振荡混匀。置37℃下孵育30分钟。

1.4.4  弃去板中液体，洗涤5次，方法同1.4.2。

1.4.5  每孔加底物显色液100µL，室温（20~25℃）避光显色10分钟。

1.4.6  每孔加终止液50µL。10分钟内用酶标仪测定并记录各孔在450nm波长处的吸光度（OD）值（测定前轻轻振匀，勿溢出）。

2  判定

2.1  成立条件  在酶标仪上测各孔的OD_450nm值。试验成立的条件是：阴性对照孔平均OD_450nm值应≤0.3，阳性对照孔平均OD_450nm值应＞0.6。

2.2  判定标准  

    S为样品孔OD_450nm值，P为阳性对照孔平均OD_450nm值，样品 S/P 值＜0.35 者为禽传染性支气管炎抗体阴性；样品 S/P 值 ≥0.35 者为禽传染性支气管炎抗体阳性。

【规格】 96 孔/盒或192 孔/盒或480 孔/盒

【贮藏与有效期】  2~8℃保存，有效期为12个月。

温馨提示：抗原包被板真空包装袋若有漏气，抗原包被板仍然正常有效， 不影响实验结果，请放心使用。

仅供科研使用