布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒说明书

布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒说明书  

【名  称】

通用名  布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒

汉语拼音  bu lu shijun Jingzheng ELISA kang ti jian ce shiji he

【原  理】

本品系由包被布鲁氏菌 LPS 抗原的微孔板和布鲁氏菌 LPS 酶标抗体及 其他试剂组成，应用酶联免疫竞争法原理（cELISA）检测牛、羊血清中的布鲁氏菌抗体。

【主要成分与含量】

【作用与用途】  用于检测牛、羊血清中布鲁氏菌抗体。评估牛、羊群体中布鲁氏菌的免疫状况。

【实验前准备】

1  样本处理

   待检样品准备  采集羊血液，待血液凝固后，以4000r/min离心10分钟，收集上清。或待血液凝固后自然析出血清。血清应澄清，无溶血。

2  洗涤液配制

将20倍浓缩洗涤液取出并恢复至室温，摇动使沉淀溶解（最好在37℃水浴锅中加热5～10分钟），然后用蒸馏水或去离子20倍稀释（例如：10mL的浓缩洗涤液加上190mL纯水），混匀，稀释好的洗涤液在2～8℃下可以存放7日。

3 样品稀释：

待检血清5倍稀释：具体为在血清稀释板中按5倍稀释待检血清（120μL样品稀释液中加30μL待检血清，混匀即可；注意：阳性对照和阴性对照不用稀释）。

【用法与判定】

1 操作步骤

1.1使用前将试剂盒置于室温 30 分钟以上，待其恢复至室温。

1.2取所需用量（待检样本数及设阴性、阳性对照各2孔）的抗原包被板条（未用的板条尽快密封，在2~8℃干燥保存），每孔加入洗涤液300μL，洗涤2次，在吸水材料上拍干。

1.3阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照50μL；样品孔每孔加入50μL稀释好的待检血清样本，然后再在每孔中加入酶标记物50μL。

1.4轻微振荡混匀1分钟；盖上封板膜，置于37℃环境避光反应30分钟。

1.5洗板：小心揭开封板膜，将孔内液体甩干，加洗涤液300μL/孔，无需静置，弃去液体，充分洗涤 4~5次，最后一次用吸水纸拍干。

1.6显色：每孔加入底物显色液100μL，轻轻振荡混匀，并在室温（20~25℃）下避光反应15分钟。

1.7读数：每孔各加50μL终止液，在酶标仪于450nm处测定OD值（在10分钟内读完数据）。

2  判定  

2.1 试验成立的条件

阴性对照OD_450nm平均值应≥0.60；

阳性对照OD_450nm平均值应≤0.20，或阳性对照抑制率在80%以上。

2.2  计算与判定

结果计算： S为待检样品OD_450nm值，N为阴性对照OD_450nm平均值，待检样品抑制率（PI）=（1-S/N）×100%。

结果判定：

如果待检样品抑制率≥50%，则判为布鲁氏菌抗体阳性；

如果抑制率<50%，则判为布鲁氏菌抗体阴性。

【注意事项】

1. 用于检测的样品应保持新鲜血清保存时间不能太久，血清解冻后应该充 分混匀，血清稀释后在加样前也要混合均匀，解冻后的血清争取一次性 检测完毕，如需做多次检测，建议少量分装冷冻保存。

2. 若血清出现浑浊或沉淀，建议离心后取上清检测。

3. 微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽后方可，未用完 的微孔板须放入有干燥剂的密封袋中保存。

4. 不同批号试剂组分不得混用。

【规   格】  96 孔/盒或192 孔/盒或480 孔/盒

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。 

温馨提示：抗原包被板真空包装袋若有漏气，抗原包被板仍然正常有效， 不影响实验结果，请放心使用。

仅供科研使用